蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說明書 
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒描述： 蛋白質(zhì)羰基是由氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到自由基攻擊后轉(zhuǎn)變而來，在體內(nèi)主要通過
金屬離子催化氧化系統(tǒng)形成，是多種氨基酸在蛋白質(zhì)氧化修飾過程中的早期標(biāo)志。羰基化蛋白極易相
互交聯(lián)、聚集為大分子從而降低或失去原有蛋白質(zhì)的功能，其含量能夠反應(yīng)蛋白質(zhì)氧化損傷的程度，
可作為衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
蛋白質(zhì)羰基能夠與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成紅色 2,4-二硝基苯腙沉淀，產(chǎn)物在 370 nm 處具有特
征吸收峰，通過吸光值的變化即可定量檢測蛋白質(zhì)羰基的含量。
需自備試劑：乙酸乙酯（C4H8O2，MW=88.10，CAS: 141-78-6）；無水乙醇（C2H6O，MW=46.07，CAS: 64-17-5）
測定過程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研缽
/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水。
①組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液 A 體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱取 0.1 g 組織，
加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 5000 rpm 離心 10 min，取全部上清至離心管中，加
入 0.1 mL 提取液 B，室溫靜置 10 min，4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測樣本，置于冰上
待測。 ②細(xì)菌或細(xì)胞：離心收集細(xì)菌或細(xì)胞至離心管內(nèi)，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液 A 體積
（mL）為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴超聲
破碎（功率 300 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時(shí)間 3 min），4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測
樣本，置于冰上待測。 ③血清、培養(yǎng)液等液體樣本：直接測定或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
測定步驟： ①分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長至 370 nm，試劑五調(diào)零。 ②在離心管中依次加入下列試劑（避光條件下進(jìn)行） 
吸光值測定：取 200 μL 反應(yīng)液于 96 孔板或微量石英比色皿，測定 370 nm 處吸光值，記為 A 測
定和 A 對(duì)照，計(jì)算 ΔA 測定=A 測定-A 對(duì)照。注：每個(gè)樣品均需設(shè)一個(gè)對(duì)照組
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說明書含量計(jì)算： 
注釋：VS5：反應(yīng)體系中加入試劑五的體積，0.3 mL；V1：組織樣品提取后總體積，1.1 mL；V2：
細(xì)菌或細(xì)胞樣本提取后總體積，1 mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入待測樣本的體積，0.06 mL；ε：蛋白質(zhì)
羰基消光系數(shù)，22 mL/μmol/cm；d：96 孔 UV 板光徑，0.5 cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣
品質(zhì)量，g；細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量：以萬計(jì)。 
注意事項(xiàng)： ①提取液 B 應(yīng)根據(jù)使用量現(xiàn)用現(xiàn)配，配置后置于 4℃保存，若變?yōu)楹谏珓t停止使用； ②試劑一見光易分解，反應(yīng)過程需在避光條件下進(jìn)行； ③試劑四為沉淀洗滌液，需重復(fù)加入三次對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌； ④為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書（以實(shí)際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)），
確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測定，
過程中問題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒
文章來源：http://www.cjs100.cn/newss-181.html |
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